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糖原檢測試劑盒(測肝臟、肌肉組織)樣本的處理方法!
更新時(shí)間:2019-06-14   點(diǎn)擊次數(shù):2098次

糖原檢測試劑盒(測肝臟、肌肉組織)樣本的處理方法!

 

一、測定原理:
 
糖原在濃硫酸的作用下可脫水生成糖醛衍生物,后者再與蒽酮作用形成藍(lán)色化合物,與同法處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液比色定量。糖原在濃堿溶液中非常穩(wěn)定,故在顯色之前先將組織放入濃堿中加熱以破壞其它成分而保留糖原。

 

樣本前處理:
1.取樣:取新鮮肝臟或肌肉樣本生理鹽水漂洗后,濾紙吸干,稱重(樣本重量≤100mg 為宜)。

2.水解:按樣本重量(mg):堿液體積(μl)=1:3,一起加入試管,沸水浴煮 20min,流水冷卻。

例如:肝臟組織稱重 75mg 按重量體積比 1:3 應(yīng)加入試劑 A 的量為 225μl;肌肉組織稱重 85mg 按重量體積比 1:3 應(yīng)加入試劑 A 的量為 255μl

*注:煮前用冰箱保鮮膜將管口扎起,以防水分蒸發(fā)。然后在膜上用針頭扎一小孔,以便氣體熱脹冷縮。

3.將糖原水解液進(jìn)一步制備糖原檢測液:
肝糖原檢測液為 1%,加蒸餾水的量為:肝臟重量×100-肝臟重量×4*=肝臟重量×96
肌糖原檢測液為 5%,加蒸餾水的量為:肌肉重量×20-肌肉重量×4*=肌肉重量×16

注:4*為水解時(shí)堿液與組織的體積數(shù)。
例如上例:制備 1%肝糖原檢測液,加蒸餾水的量為:75×96=7200μl=7.2ml;
制備 5%肌糖原檢測液,加蒸餾水的量為:85×16=1360μl=1.36ml。

 

脂肪肝樣本糖原測定
一、樣本前處理:
取樣:取新鮮肝臟樣本用生理鹽水漂洗后,濾紙吸干,稱重(樣本重量≤100mg 為宜,不要>100mg)。
2、水解:按樣本重量(mg):堿液體積(μl)=1:3,一起加入試管,沸水浴煮20min,流水冷卻。
   注:在煮前用冰箱保鮮膜將管口扎起,以防水分蒸發(fā)。然后在膜上用針頭扎一小孔,以便氣體熱脹冷縮。
3、將糖原水解液進(jìn)一步制備糖原檢測液:
  肝糖原檢測液為5%,加雙蒸水的量為:肝臟重量×20-肝臟重量×4*=肝臟重量×16
  注:4*為水解時(shí)堿液與組織的體積數(shù)。
4、檢測液除脂:取上述制備好的檢測液(一般可見檢測液上層漂浮有乳白色油狀物),加入一定量的lv仿,可按照檢測液量(ml):lv仿(ml)=4:1,漩渦混勻,3500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘,取上清用于測定(如含量較高,需稀釋后再測定)

 

糖原檢測試劑盒(測肝臟、肌肉組織)樣本的處理方法!

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